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產(chǎn)品簡介
產(chǎn)品名稱 ：人終板軟骨細(xì)胞
產(chǎn)品品牌 ：通蔚生物
組織來源 ：椎間盤組織
產(chǎn)品規(guī)格 ：5×105cells/T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
細(xì)胞簡介
人終板軟骨細(xì)胞分離自椎間盤終板軟骨組織。椎體終板是椎體在生長發(fā)育過程中，椎體上下面的骨骺板骨化停止后形成骨板，呈輕度凹陷，即為骨性終板。椎體終板的中央仍為一薄層透明軟骨覆蓋，并終生存在，即為軟骨終板，上下軟骨終板與髓核和纖維環(huán)連接共同構(gòu)成椎間盤。椎體終板構(gòu)成了椎間盤的上下邊界，位于椎體中心的松質(zhì)骨和椎間盤之間。
是由軟骨下骨和厚度相當(dāng)?shù)母采w其上的軟骨組成。主要作用是防止椎間盤髓核組織嵌入椎體，同時具有平衡分散應(yīng)力的作用。成熟的終板軟骨細(xì)胞多2-8個成群分布于軟骨陷窩內(nèi)，這些終板軟骨細(xì)胞由同一個母細(xì)胞分裂增殖而成，稱為同源細(xì)胞群。
電鏡下，終板軟骨細(xì)胞有突起和皺褶，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達(dá)的高爾基復(fù)合體及少量的線粒體。在組織切片中，終板軟骨細(xì)胞收縮為不規(guī)則形，在軟骨囊和細(xì)胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。體外培養(yǎng)的終板軟骨細(xì)胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。
方法簡介
通蔚生物實驗室分離的人終板軟骨細(xì)胞采用膠原酶-中性蛋白酶聯(lián)合消化并結(jié)合軟骨細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測
通蔚生物實驗室分離的人終板軟骨細(xì)胞經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90% 以上，且不含有H IV -1、H BV 、H C V 、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息
培 養(yǎng) 基 ：含F(xiàn)BS、EG F、Insulin 、T ran sferrin、Selenium、Solution、Penicillin、Streptom ycin等
換液頻率 ：每3-4天換液一次
生長特性 ：貼壁
細(xì)胞形態(tài) ：梭形、多角形
傳代特性 ：可傳3代左右
傳代比例 ：1:2
消 化 液 ：0. 25% 胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 ：氣相 ：空氣，95% 。C O2，5%
人終板軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限。建議使用通蔚生物配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時發(fā)送細(xì)胞電子版照片
使用方法
人終板軟骨細(xì)胞是一種貼壁細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈梭形、多角形，在通蔚生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳3代左右。建議您收到細(xì)胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細(xì)胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T 25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75% 酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1）吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次。
2）添加0. 25% 胰蛋白酶消化液1m L至T 25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3min。倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml完全培養(yǎng)基終止消化。
3）用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至
5m L，置于37℃、5% C O 2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4）待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yǎng)基。
3. 復(fù)蘇操作說明
1. 準(zhǔn)備好37度水浴鍋，預(yù)熱至37度。
2. 準(zhǔn)備好T25培養(yǎng)瓶，加入10ml完全培養(yǎng)基（培養(yǎng)基量必須大于凍存液10倍體積）。
3. 取出干冰內(nèi)凍存細(xì)胞管，用EP手套包裹凍存管（防止管內(nèi)進水導(dǎo)致污染），迅速放于水
浴鍋內(nèi)，于1min內(nèi)融化完全。
4. 取出凍存管，酒精噴灑消毒后擦干，置于超凈臺內(nèi)。
5. 吸取凍存管內(nèi)細(xì)胞懸液，加入步驟2中準(zhǔn)備好的T25培養(yǎng)瓶內(nèi)，8字緩慢搖勻。
6. 培養(yǎng)瓶放于37度C O 2恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，靜置培養(yǎng)24h，更換新鮮換培養(yǎng)基（注意貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞不同換液操作方法）。
4. 細(xì)胞實驗
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0. 1m g/m l），明膠（0. 1% ），依據(jù)細(xì)胞種類而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無需包被。
注意事項
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和通蔚生物技術(shù)部溝通。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問題得到解決。
