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產(chǎn)品及特點(diǎn)：
傳染性脾腎壞死病病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus，ISKNV)引起傳染性脾腎壞死病，又叫鱖暴發(fā)性出血病，它是一種嚴(yán)重危害淡水養(yǎng)殖鱖的傳染性、病毒性疾病，可引起暴發(fā)性死亡，我國將其列為二類疫病。傳染性脾腎壞死病毒屬虹彩病毒科，病毒有囊膜，二十面體，直徑 125～145nm，病毒基因組為雙鏈 DNA。傳染性脾腎壞死病主要流行于我國南方淡水養(yǎng)殖的鱖中，具有很高的死亡率，對鱖養(yǎng)殖業(yè)造成很大的威脅。鱖是 ISKNV的自然宿主和敏感宿主，但該病毒還可以感染 50 多種海、淡水養(yǎng)殖魚類，因此傳染性脾腎壞死病病毒的快速診斷具有重要意義。
1. 即開即用，用戶只需要提供DNA模板。
2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增傳染性脾腎壞死病病毒，與其他病原沒有交叉反應(yīng)。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。
規(guī)格及成分：
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編號 |
成分 |
規(guī)格 |
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試劑一 |
PCR MagicMix 3.0 |
1mL（紅蓋） |
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試劑二 |
超純水 |
1mL（亮黃色） |
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試劑三 |
傳染性脾腎壞死病病毒PCR引物混合液 |
100μL（白蓋） |
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試劑四 |
傳染性脾腎壞死病病毒PCR陽性對照（1×10E8 /μL） |
50μL（黃蓋） |
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試劑五 |
使用手冊 |
1 份 |
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。
自備試劑：
樣品 DNA。
使用方法：
一、樣品 DNA 的制備：
1. 用自選方法純化N+2個樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容?？梢赃x用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N個樣品，則需要做N+2個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 傳染性脾腎壞死病病毒 PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系)：
3. 對N+2個樣品，在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照，故需要設(shè)置N+4個反應(yīng)。在N+4個PCR管中分別加入下列成分：
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成份 |
N+2個樣品管 |
PCR陰性對照 |
PCR陽性對照 |
|
PCR Magic Mix 3.0 |
各20μL |
20μL |
20μL |
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傳染性脾腎壞死病病毒PCR引物混合液 |
各2μL |
2μL |
2μL |
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N+2個樣品DNA模板 |
各18μL |
-- |
-- |
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PCR陰性對照（水） |
-- |
18μL |
-- |
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PCR陽性對照（傳染性脾腎壞死病病毒PCR陽性對照1000倍稀釋液） |
-- |
-- |
18μL |
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過程 |
溫度 |
時間 |
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預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
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PCR 反應(yīng)35個循環(huán) |
95℃ |
30 sec |
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55℃ |
30 sec |
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72℃ |
40 sec |
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最后延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽 性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。
四、特別提示：
本公司的所有產(chǎn)品，僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
