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改良安卡拉痘苗病毒PCR試劑盒

產(chǎn)品及特點(diǎn)：

改良型痘苗病毒安卡拉株( modified vaccinia virus Ankara,MVA)是人類在尋求痘苗病毒作為天花疫苗的過程中獲得的高度減毒的痘苗毒株，MVA來源于一個土耳其的痘病毒毒株 (chorioallantois vaccinia virusAnkara,CVA),CVA 在雞成纖維細(xì)胞中傳代 570 代后得到 MVA。本產(chǎn)品就是為快速靈敏檢測改良型痘苗病毒安卡拉株，根據(jù) PCR 原理開發(fā)的試劑盒，

1. 即開即用，用戶只需要提供DNA模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增改良安卡拉痘苗病毒，與其他病原沒有交叉反應(yīng)。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。

規(guī)格及成分：

編號	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1 mL（亮黃色）
試劑三	改良安卡拉痘苗病毒PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	改良安卡拉痘苗病毒PCR 陽性對照（1×10E8 /μL）	50 μL（黃蓋）
試劑五	使用手冊	1 份

運(yùn)輸及保存：

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。

自備試劑：

樣品 DNA。

使用方法：

一、樣品 DNA 的制備：

1. 用自選方法純化N+2個樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。

2. 如果有N個樣品，則需要做N+2個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 改良安卡拉痘苗病毒PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系)：

3. 對N+2個樣品，在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照，故需要設(shè)置N+4個反應(yīng)。在N+4個PCR管中分別加入下列成分：

成份	N+2 個樣品管	PCR 陰性對照	PCR陽性對照
PCR Magic Mix 3.0	各 20μL	20μL	20μL
改良安卡拉痘苗病毒PCR 引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2個樣品DNA模板	各18μL	--	--
PCR 陰性對照（水）	--	18μL	--
PCR 陽性對照（改良安卡拉痘苗病毒PCR陽性對照1000倍稀釋液）	--	--	18μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過程	溫度	時間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR 反應(yīng)35個循環(huán)	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、電泳檢測：

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽性對照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴(kuò)增，否則實驗無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。

四、特別提示：

本公司的所有產(chǎn)品，僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

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改良安卡拉痘苗病毒PCR試劑盒說明書
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細(xì)胞系

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