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杜氏利什曼蟲(黑熱病病原蟲)PCR試劑盒

產(chǎn)品及特點(diǎn)：

利什曼原蟲是一種胞內(nèi)寄生原蟲, 由媒介昆蟲白蛉傳播。寄生人體的利什曼原蟲主要有杜氏利什曼原蟲、碩大利什曼原蟲、墨西哥利什曼原蟲、巴西利什曼原蟲等, 其中, 杜氏利什曼原蟲引起的黑熱病癥狀最重, 致死率極高。

1. 即開即用，用戶只需要提供DNA模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增杜氏利什曼蟲(黑熱病病原蟲)，與其他病原沒有交叉反應(yīng)。

3. 提供陽性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。

規(guī)格及成分：

編號(hào)	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.0	1mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1mL（亮黃色）
試劑三	杜氏利什曼蟲(黑熱病病原蟲)PCR引物混合液	100μL（白蓋）
試劑四	杜氏利什曼蟲(黑熱病病原蟲)PCR陽性對(duì)照（1×10E8 /μL）	50μL（黃蓋）
試劑五	使用手冊	1 份

運(yùn)輸及保存：

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。

自備試劑：

樣品 DNA。

使用方法：

一、樣品 DNA 的制備：

1. 用自選方法純化N+2個(gè)樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。

2. 如果有N個(gè)樣品，則需要做N+2個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽性對(duì)照和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽性對(duì)照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 杜氏利什曼蟲(黑熱病病原蟲) PCR 陽性對(duì)照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系)：

3. 對(duì)N+2個(gè)樣品，在PCR時(shí)需要增加一個(gè)PCR陽性對(duì)照和一個(gè)PCR陰性對(duì)照，故需要設(shè)置N+4個(gè)反應(yīng)。在N+4個(gè)PCR管中分別加入下列成分：

成份	N+2個(gè)樣品管	PCR陰性對(duì)照	PCR陽性對(duì)照
PCR Magic Mix 3.0	各20μL	20μL	20μL
杜氏利什曼蟲黑熱病病原蟲PCR引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2個(gè)樣品DNA模板	各18μL	--	--
PCR陰性對(duì)照(水)	--	18μL	--
PCR陽性對(duì)照杜氏利什曼蟲黑熱病病原蟲PCR陽性對(duì)照1000倍稀釋液	--	--	18μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR 反應(yīng)35個(gè)循環(huán)	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
最后延伸	72℃	7 min

三、電泳檢測：

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。

四、特別提示：

本公司的所有產(chǎn)品，僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

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杜氏利什曼蟲(黑熱病病原蟲)PCR試劑盒說明書
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