細(xì)胞名稱

LLC-GFP/小鼠Lewis肺癌細(xì)胞-綠色熒光蛋白標(biāo)記

貨 號(hào)

TW-CC3778

細(xì)胞品牌

通蔚生物

種屬來(lái)源

小鼠

組織來(lái)源

肺

生長(zhǎng)特性

半貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)

上皮細(xì)胞樣

細(xì)胞簡(jiǎn)介

Luciferase LLC細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)螢光蛋白。該細(xì)胞株性狀穩(wěn)定，培養(yǎng)時(shí)不需要添加抗生素維持。可用作螢光蛋白活性檢測(cè)中的陽(yáng)性對(duì)照，也可用于活體動(dòng)物成像實(shí)驗(yàn)。該細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶GFP基因。LLC細(xì)胞是小鼠Lewis肺癌細(xì)胞。

puro藥篩濃度

LLC-GFP細(xì)胞puro藥篩濃度為1. 0ug/ml，培養(yǎng)過(guò)程中可不用再添加puro，如若擔(dān)心抗性隨著傳代時(shí)間降低，可定期用0.5ug/ml濃度puro維持

保藏機(jī)構(gòu)

ATCC; CRL-1642 BCRC; 60050 BCRJ; 0145 ECACC; 90020104

生物安全等級(jí)

1

細(xì)胞規(guī)格

1x10?cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管

培養(yǎng)基

90% DMEM+10% FBS+PS

培養(yǎng)條件

氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件

無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

細(xì)胞貨期

現(xiàn)貨，1周左右

發(fā)貨方式

復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運(yùn)輸費(fèi)用）/  凍存發(fā)貨（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用）

供應(yīng)范圍

僅限于科研實(shí)驗(yàn)使用，絕不可作為動(dòng)物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用

T25瓶

收貨處理

觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-4h，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)

傳代密度

細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)

傳代比例

首次傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿

傳代方法

a、收集細(xì)胞培養(yǎng)上清：抽出瓶中的培養(yǎng)基和懸浮的細(xì)胞1000rpm離心5分鐘，棄去上清，細(xì)胞重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中（加入按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基）。

b、剩下貼壁的細(xì)胞，用不含鈣、鎂離子的PBS輕輕潤(rùn)洗細(xì)胞1次。

c、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

d、按3mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻吹下細(xì)胞后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

e、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)中。

注意事項(xiàng)

1.運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。

2.因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。

凍存管

收貨處理

收到細(xì)胞后，需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇

傳代密度

第二天換液并檢查細(xì)胞密度

傳代比例

一管細(xì)胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶

傳代方法

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

注意事項(xiàng)

1.收貨時(shí)若發(fā)現(xiàn)干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察，若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存。

2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請(qǐng)立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞。

凍存液配方

無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

細(xì)胞密度

待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例

凍存方法

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5x106~1x107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項(xiàng)

凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案

細(xì)胞予
重發(fā)

1.細(xì)胞運(yùn)輸中遭遇的各種問(wèn)題，細(xì)胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)。

2.收到細(xì)胞未開(kāi)封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。

3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問(wèn)題，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。

4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置2小時(shí)后，干冰凍存發(fā)貨細(xì)胞復(fù)蘇2天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。

5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置22小時(shí)并且未開(kāi)封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。

6.細(xì)胞活性問(wèn)題，請(qǐng)?jiān)谑盏疆a(chǎn)品3天內(nèi)給我們提出真實(shí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實(shí)后，重發(fā)。

細(xì)胞不予
重發(fā)

1.客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)。

2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

4.細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實(shí)清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。

5.細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題的，不重發(fā)。

6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問(wèn)題與客服人員溝通的時(shí)間證明大于3天的，不重發(fā)。

特別說(shuō)明

上海通蔚生物客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,有任何技術(shù)問(wèn)題可以撥打免費(fèi)服務(wù)電話 : 021-54845833 ,我們隨時(shí)給予實(shí)驗(yàn)中的免費(fèi)解答。