細胞名稱

 HEI-OC1耳蝸毛細胞株

細胞品牌

通蔚生物

細胞規(guī)格

1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶

細胞英文

HEIOC1 ; House Ear Institute-Organ of Corti 1

細胞株來源

豪斯耳科學院 House Ear Institute

細胞簡介

HEI-OC1是為數(shù)不多的用于研究目的的小鼠聽覺細胞系之一。這些細胞最初被認為是一種用于篩選耳毒性藥物的體外系統(tǒng)，已被用于研究藥物激活的凋亡途徑、自噬、衰老、細胞保護機制、炎癥反應、細胞分化、藥物的遺傳和表觀遺傳效應、缺氧、氧化和內(nèi)皮細胞的作用，耳蝸中分子通道和受體的表達。在耳蝸毛細胞的其他幾個重要標志物中，HEI-OC1細胞在耳蝸毛細胞內(nèi)表達Prestin蛋白，這是外毛細胞的典型運動蛋白。因此，HEIOC1細胞對于闡明這種重要聽覺蛋白的新功能和作用機理方面非常有用。HEI-OC1細胞非常健壯，其培養(yǎng)通常不會出現(xiàn)大的并發(fā)癥。但是，它們需要一些特殊的條件，例如避免使用含有鏈霉素或其他抗生素，以及在33°C下孵育以刺激細胞增殖，在39°C下孵育以觸發(fā)細胞分化

種屬來源

小鼠

組織來源

耳蝸螺旋器

疾病特征

正常

用途

各種藥物對于聽力細胞毒性毒理學檢測

說明

細胞生長條件是33度時，細胞會出現(xiàn)快速增值和去分化現(xiàn)象。生長條件是39度時，細胞增殖出現(xiàn)停止48h，同時誘導細胞出現(xiàn)分化

支原體檢測

陰性

細胞形態(tài)

上皮細胞樣

生長特性

貼壁生長

生長條件

氣相：空氣，95% ；二氧化碳，5% ; 溫度：37℃

傳代方法

1：2至1：6，每周2次

培 養(yǎng) 基

DMEM培養(yǎng)基，90%；FBS，10%。二氧化碳10%，33度培養(yǎng)

凍存條件

90% 完全培養(yǎng)基+10% DMSO，液氮儲存

發(fā)貨方式

快遞運輸(特殊情況的另處理)

供應范圍

僅限于科研實驗使用，不得用于其它用途

處理1

收到細胞后，請檢查是否漏液 ，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們

處理2

請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h

處理3

棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基

處理4

如果細胞密度達80%-90%請及時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司的完全培養(yǎng)基

處理5

接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系

復蘇細胞

將含有1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

細胞傳代

如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng):

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加 1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細胞凍存

待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類:

1. 棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓脫落后，加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2. 4 min 1000rpm離心去掉上清。加1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO終濃度為10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存1ml 細胞懸液，注意凍存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

注意事項

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落，將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細胞均會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常， 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細胞無活力，請拍下照片及時和我們聯(lián)系，信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。

4. 靜置細胞貼壁后，請將細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出，留 6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng)，待細胞匯合度80%左右時正常傳代。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)，培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細胞逐漸適應培養(yǎng)條件。

細胞予重發(fā)

1. 細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等，重發(fā)。

2. 收到細胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。

3. 收到細胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)。

4. 常溫發(fā)貨細胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨細胞復蘇2天后，絕大多數(shù)細胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā)。

5. 常溫發(fā)貨的細胞靜置22小時且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇2天后，出現(xiàn)污染經(jīng)核實后，重發(fā)。

6. 細胞活性問題在收到產(chǎn)品3天內(nèi)提出真實實驗結(jié)果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)。

細胞不予重發(fā)

1. 客戶操作造成細胞污染，不重發(fā)。

2. 客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

3. 非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。

4. 細胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。

5. 細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導致細胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)。

6. 收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)。

特別說明

上海通蔚生物客戶在細胞培養(yǎng)過程中，有任何技術(shù)問題可以撥打免費服務電話021-54845833或15800441009，我們隨時給予實驗中的免費解答。