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豬附紅細(xì)胞體(豬嗜血支原體)PCR試劑盒

產(chǎn)品及特點(diǎn)：

豬附紅細(xì)胞體病(Eperythrogoonosis)是由附紅細(xì)胞體感染機(jī)體而引起的人畜共患傳染病。按其主要特征應(yīng)屬于血液病。發(fā)病原因是由于應(yīng)激導(dǎo)致的抵抗力下降，從而使得附紅細(xì)胞體侵入畜體，從而患上豬附紅細(xì)胞體病，目前這種病主要有貧血發(fā)紺、皮膚黃疸、發(fā)熱氣喘、便血尿血四個(gè)特征癥狀。豬附紅細(xì)胞體病的可通過直接或間接的傳播方式，其吸血昆蟲的傳播是最重要的，并且附紅細(xì)胞體分裂速度快，所以此病一旦發(fā)生，幾日內(nèi)便會(huì)出現(xiàn)病癥。

本公司開發(fā)豬附紅細(xì)胞體（豬嗜血支原體）PCR 試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供DNA模板。

2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增豬附紅細(xì)胞體（豬嗜血支原體），與其他病原沒有交叉反應(yīng)。

3. 提供陽性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。

5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。

規(guī)格及成分：

編號(hào)	成分	規(guī)格
試劑一	PCR MagicMix 3.0	1 mL（紅蓋）
試劑二	超純水	1 mL（亮黃色）
試劑三	豬附紅細(xì)胞體（豬嗜血支原體） PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑四	豬附紅細(xì)胞體（豬嗜血支原體） PCR 陽性對(duì)照（1×10E8 /μL）	50 μL（黃蓋）
試劑五	使用手冊(cè)	1 份

運(yùn)輸及保存：

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。

自備試劑：

樣品DNA。

使用方法：

一、樣品 DNA 的制備：

1. 用自選方法純化N+2個(gè)樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容?？梢赃x用本公司柱式病毒 DNAout。

2. 如果有N個(gè)樣品，則需要做N+2個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽性對(duì)照和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽性對(duì)照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 豬附紅細(xì)胞體（豬嗜血支原體）PCR 陽性對(duì)照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后得到模板 DNA 放冰上待用。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系)：

3. 對(duì)N+2個(gè)樣品，在PCR時(shí)需要增加一個(gè)PCR陽性對(duì)照和一個(gè)PCR陰性對(duì)照，故需要設(shè)置N+4個(gè)反應(yīng)。在N+4個(gè)PCR管中分別加入下列成分：

成份	N+2 個(gè)樣品管	PCR 陰性對(duì)照	PCR陽性對(duì)照
PCR Magic Mix 3.0	各 20μL	20μL	20μL
豬附紅細(xì)胞體豬嗜血支原體PCR引物混合液	各2μL	2μL	2μL
N+2個(gè)樣品DNA模板	各18μL	--	--
PCR陰性對(duì)照(水)	--	18μL	--
PCR陽性對(duì)照豬附紅細(xì)胞體豬嗜血支原體PCR陽性對(duì)照1000倍稀釋液	--	--	18μL

4. 按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過程	溫度	時(shí)間
預(yù)變性	95℃	5 min
PCR 反應(yīng)35個(gè)循環(huán)	95℃	30 sec
	55℃	30 sec
	72℃	40 sec
延伸	72℃	7 min

三、電泳檢測(cè)：

5. 取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。PCR 產(chǎn)物陽性對(duì)照必須有 551bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí) 驗(yàn)無效。對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以排除 PCR 抑制劑的感染。

四、特別提示：

本公司的所有產(chǎn)品，僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！

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豬附紅細(xì)胞體(豬嗜血支原體)PCR試劑盒說明書
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細(xì)胞庫(kù)

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原代細(xì)胞

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