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ELISA技術(shù)支持

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新手速看!ELISA實驗常見6類問題解答!

發(fā)布時間:2025-02-08     發(fā)布作者:上海通蔚生物

  Elisa技術(shù)成為現(xiàn)今實驗室不可或缺一部分,它具有靈敏度高、操作簡單和安全備受青睞。即使操作簡單,但是ELISA屬于較為專業(yè)的技術(shù),在操作中也難免會出錯。上海通蔚結(jié)合多年實驗室經(jīng)驗為大家總結(jié)在ELISA實驗中常見問題,了解這些問題可以在實驗中少走彎路,提高實驗效率,尤其是對于新手。

酶聯(lián)免疫吸附實驗


  1、ELISA實驗耗時多久?


  Elisa耗時多久沒有明確定義,往往和實驗類型、所用試劑盒及操作方法有關(guān)。例如:雙抗體夾心法需3.5-4小時不等,而競爭法則需要2-2.5小時不等。大家在選購試劑盒時候順便可以咨詢商家,了解試劑盒耗時情況。相關(guān)閱讀:《elisa試劑盒有類型


  2、血清樣本應如何處理?


  采集全血樣本后,迅速將其轉(zhuǎn)移到帶蓋或蓋子的試管中——這將防止在離心過程中傳染性顆粒蒸發(fā)和氣溶膠化。讓樣本在室溫下凝結(jié)90分鐘,以完全形成凝塊。不要讓樣本在4攝氏度下凝結(jié),因為這可能會導致纖維蛋白形成。在室溫下凝結(jié)90分鐘后,在離心之前,用木制涂抹棒沿著試管內(nèi)壁滑動,以破壞凝塊對試管壁的粘附。在室溫下以2000Xg的速度離心樣本15分鐘。(要將2000Xg轉(zhuǎn)換為rpm,請參閱特定離心機的操作手冊)。


  離心后,取出血清并將其放入聚丙烯微量離心管中。請勿將樣品儲存/運輸在玻璃管中。在玻璃管上清楚地貼上識別信息標簽。


  3、血漿樣本處理步驟是什么?


  采集全血樣本后,迅速將其轉(zhuǎn)移到帶有抗凝劑和蓋子的試管中——這將防止在離心過程中傳染性顆粒蒸發(fā)和氣溶膠化。倒置試管,使樣本與抗凝劑充分混合。在室溫下以2000Xg的速度離心樣本15分鐘。(要將2000Xg轉(zhuǎn)換為rpm,請參閱特定離心機的操作手冊)。


  離心后,取出血漿并將其放入聚丙烯微量離心管中。盡量小心,不要將紅細胞與血漿一起轉(zhuǎn)移。請勿將樣品儲存/運輸在玻璃管中。在玻璃管上清楚地貼上識別信息標簽。


  4、組織樣本應如何處理?


  將組織勻漿放入PBS(不含洗滌劑或EDTA)中。使用機械勻漿器后,對勻漿進行超聲處理60秒,以確保細胞破碎。離心組織勻漿以去除細胞碎片。


  離心后,取出組織勻漿上清液,放入聚丙烯微量離心管中。請勿將樣品儲存/運輸在玻璃管中。在玻璃管上清晰地貼上識別信息標簽。


  5、為何部分試劑盒采用競爭ELISA法?


  競爭法ELISA優(yōu)勢適用于檢測小分子抗原或半抗原。夾心法因缺乏足夠的位點進行雙抗體夾心檢測,所以會選擇競爭法ELISA。其檢測原理為樣本抗原與固相抗原競爭抗體結(jié)合位點,樣本抗原越多,固相抗體結(jié)合越少,顯色越淺,既顯色與樣本抗原濃度成反比。


  6、推薦哪款軟件來處理ELISA數(shù)據(jù)?


  數(shù)據(jù)分析用的較多是CurveExper,CurveExpert軟件是處理ELISA數(shù)據(jù)標準曲線的優(yōu)選工具。相關(guān)閱讀:《elisa試劑盒如何定量蛋白濃度


  上述是通蔚為初學者總結(jié)的一些ELISA常見的問題,這是我們在與客戶溝通中反饋較多的問題,整理出來,希望對大家實驗有所幫助!如果您對實驗問題還有其它疑問,歡迎指出,我們會竭盡全力為您解答!祝您實驗愉快!

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