Elisa技術(shù)成為現(xiàn)今實驗室不可或缺一部分，它具有靈敏度高、操作簡單和安全備受青睞。即使操作簡單，但是ELISA屬于較為專業(yè)的技術(shù)，在操作中也難免會出錯。上海通蔚結(jié)合多年實驗室經(jīng)驗為大家總結(jié)在ELISA實驗中常見問題，了解這些問題可以在實驗中少走彎路，提高實驗效率，尤其是對于新手。

  1、ELISA實驗耗時多久？

  Elisa耗時多久沒有明確定義，往往和實驗類型、所用試劑盒及操作方法有關(guān)。例如：雙抗體夾心法需3.5-4小時不等，而競爭法則需要2-2.5小時不等。大家在選購試劑盒時候順便可以咨詢商家，了解試劑盒耗時情況。相關(guān)閱讀：《elisa試劑盒有類型》

  2、血清樣本應如何處理？

  采集全血樣本后，迅速將其轉(zhuǎn)移到帶蓋或蓋子的試管中——這將防止在離心過程中傳染性顆粒蒸發(fā)和氣溶膠化。讓樣本在室溫下凝結(jié)90分鐘，以完全形成凝塊。不要讓樣本在4攝氏度下凝結(jié)，因為這可能會導致纖維蛋白形成。在室溫下凝結(jié)90分鐘后，在離心之前，用木制涂抹棒沿著試管內(nèi)壁滑動，以破壞凝塊對試管壁的粘附。在室溫下以2000Xg的速度離心樣本15分鐘。（要將2000Xg轉(zhuǎn)換為rpm，請參閱特定離心機的操作手冊）。

  離心后，取出血清并將其放入聚丙烯微量離心管中。請勿將樣品儲存/運輸在玻璃管中。在玻璃管上清楚地貼上識別信息標簽。

  3、血漿樣本處理步驟是什么？

  采集全血樣本后，迅速將其轉(zhuǎn)移到帶有抗凝劑和蓋子的試管中——這將防止在離心過程中傳染性顆粒蒸發(fā)和氣溶膠化。倒置試管，使樣本與抗凝劑充分混合。在室溫下以2000Xg的速度離心樣本15分鐘。（要將2000Xg轉(zhuǎn)換為rpm，請參閱特定離心機的操作手冊）。

  離心后，取出血漿并將其放入聚丙烯微量離心管中。盡量小心，不要將紅細胞與血漿一起轉(zhuǎn)移。請勿將樣品儲存/運輸在玻璃管中。在玻璃管上清楚地貼上識別信息標簽。

  4、組織樣本應如何處理？

  將組織勻漿放入PBS（不含洗滌劑或EDTA）中。使用機械勻漿器后，對勻漿進行超聲處理60秒，以確保細胞破碎。離心組織勻漿以去除細胞碎片。

  離心后，取出組織勻漿上清液，放入聚丙烯微量離心管中。請勿將樣品儲存/運輸在玻璃管中。在玻璃管上清晰地貼上識別信息標簽。

  5、為何部分試劑盒采用競爭ELISA法？

  競爭法ELISA優(yōu)勢適用于檢測小分子抗原或半抗原。夾心法因缺乏足夠的位點進行雙抗體夾心檢測，所以會選擇競爭法ELISA。其檢測原理為樣本抗原與固相抗原競爭抗體結(jié)合位點，樣本抗原越多，固相抗體結(jié)合越少，顯色越淺，既顯色與樣本抗原濃度成反比。

  6、推薦哪款軟件來處理ELISA數(shù)據(jù)？

  數(shù)據(jù)分析用的較多是CurveExper，CurveExpert軟件是處理ELISA數(shù)據(jù)標準曲線的優(yōu)選工具。相關(guān)閱讀：《elisa試劑盒如何定量蛋白濃度》

  上述是通蔚為初學者總結(jié)的一些ELISA常見的問題，這是我們在與客戶溝通中反饋較多的問題，整理出來，希望對大家實驗有所幫助！如果您對實驗問題還有其它疑問，歡迎指出，我們會竭盡全力為您解答！祝您實驗愉快！