ELISA是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定的簡(jiǎn)稱，是一種非常成熟的檢測(cè)各種靶標(biāo)（量化蛋白質(zhì)、激素、抗體和其他分子）的方法。ELISA 的優(yōu)點(diǎn)之一是其執(zhí)行快速且簡(jiǎn)單，因此通常用于診斷和研究目的。ELISA 涉及酶的使用以及抗體和抗原的特異性結(jié)合。根據(jù)其工作原理，ELISA 可分為四種主要類型：直接法、間接法、夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法。讓我們一一看看。

  在直接 ELISA 中，僅使用酶標(biāo)記的一抗，這意味著不需要二抗。酶標(biāo)記的一抗“直接”與固定在板（固體表面）上的靶標(biāo)（抗原）結(jié)合。接下來(lái)，與一抗連接的酶與其底物反應(yīng)，產(chǎn)生可測(cè)量的可見(jiàn)信號(hào)。通過(guò)這種方式，檢測(cè)到感興趣的抗原。

圖1（直接elisa）

  在間接 ELISA 中，同時(shí)使用一抗和二抗。但在這種情況下，一抗未用酶標(biāo)記。相反，二抗用酶標(biāo)記。一抗與固定在板上的抗原結(jié)合，然后酶標(biāo)二抗與一抗結(jié)合。最后，與二抗連接的酶與其底物發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生可測(cè)量的可見(jiàn)信號(hào)。

圖2（間接elisa）

  在直接和間接 ELISA 中，抗原固定在板上。然而，在夾心 ELISA 中，抗體被固定在板上，這種抗體稱為捕獲抗體。除捕獲抗體外，夾心ELISA還涉及檢測(cè)抗體的使用，一般包括未標(biāo)記的檢測(cè)一抗和酶標(biāo)的檢測(cè)二抗。

圖3（夾心elisa）

  首先，目標(biāo)抗原與固定在板上的捕獲抗體結(jié)合。其次，一抗與抗原結(jié)合。第三，檢測(cè)二抗與檢測(cè)一抗結(jié)合，然后酶與其底物發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生可測(cè)量的可見(jiàn)信號(hào)。

  與上述三種ELISA類型相比，競(jìng)爭(zhēng)性ELISA相對(duì)復(fù)雜，因?yàn)樗婕暗揭种苿┛乖氖褂茫虼烁?jìng)爭(zhēng)性ELISA也稱為抑制性ELISA。事實(shí)上，直接、間接和三明治這三種形式中的每一種都可以適應(yīng)競(jìng)爭(zhēng)形式。在競(jìng)爭(zhēng)性 ELISA 中，抑制劑抗原和目標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與一抗的結(jié)合。以下是競(jìng)爭(zhēng)性 ELISA 的程序：

圖4（競(jìng)爭(zhēng)elisa）

  首先，將未標(biāo)記的一抗與含有目的抗原的樣品一起孵育，形成抗原抗體復(fù)合物（Ag-Ab）。在這一步中，抗體與抗原相比是過(guò)量的，因此還剩下游離的抗體。

  其次，將 Ag-Ab 混合物添加到涂有抑制劑抗原的板中，該抗原也可以與一抗結(jié)合。混合物中的游離一抗與板上的抑制劑抗原結(jié)合，而混合物中的 Ag-Ab 復(fù)合物則不會(huì)結(jié)合，因此會(huì)被洗掉。

  第三，將酶標(biāo)記的二抗添加到板中并與板上的抑制劑抗原結(jié)合的一抗結(jié)合。

  最后，添加底物與酶反應(yīng)并發(fā)出可見(jiàn)信號(hào)以供檢測(cè)。

  通過(guò)此過(guò)程，您可能會(huì)發(fā)現(xiàn)最終信號(hào)與樣品中感興趣的抗原的量成反比，這意味著樣品中的抗原越多，最終信號(hào)越弱。這是因?yàn)榕c樣品抗原結(jié)合的一抗將被洗掉，而留下的游離一抗將被固定在板上的抑制劑抗原捕獲并通過(guò)酶促反應(yīng)進(jìn)行測(cè)量。

  這里描述的競(jìng)爭(zhēng)性 ELISA 基于抗體捕獲，其中板涂有抗原。還有另一種基于抗原捕獲的競(jìng)爭(zhēng)性 ELISA，其中板涂有未標(biāo)記的抗體。此外，競(jìng)爭(zhēng)性ELISA一般使用標(biāo)記抗體進(jìn)行檢測(cè)，但有時(shí)也使用標(biāo)記抗原而不是標(biāo)記抗體。

  直接、間接、夾心和競(jìng)爭(zhēng) ELISA 的比較

現(xiàn)在我們知道四種最常見(jiàn)的 ELISA 類型如何工作，但如何為您的實(shí)驗(yàn)選擇正確的類型呢？要找到答案，您需要了解每種 ELISA 類型的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)

表 1. 每種 ELISA 類型的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)

  定量和定性 ELISA

  根據(jù)ELISA能否定量目標(biāo)分子的水平，ELISA可分為定性和定量?jī)煞N。定性 ELISA 為樣品提供簡(jiǎn)單的陽(yáng)性或陰性結(jié)果，而定量 ELISA 通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線反映樣品中目標(biāo)分子的濃度。因此，如果您想定量測(cè)定目標(biāo)分子水平，請(qǐng)選擇定量ELISA。

  ELISA 可用于診斷和研究目的。ELISA檢測(cè)的疾病包括HIV、HBV、流感、溶血性貧血、萊姆病、食物過(guò)敏等。上海通蔚致力于提供高質(zhì)量、可靠的ELISA試劑盒，準(zhǔn)確、敏感、快速的檢測(cè)結(jié)果，為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。