亚洲av成人精品网站在线播放_欧美超级乱婬视频播放_性色av无码一区二区三区人妻_欧洲少妇性喷潮_伊人久久综合精品无码av专区

歡迎來到上海通蔚!
請登錄 注冊 購物車

021-54845833/15800441009

品質(zhì)保證 · 通蔚試劑

首頁>>公司新聞>>冷凍細(xì)胞:3個(gè)基本注意事項(xiàng)

公司新聞

相關(guān)新聞

冷凍細(xì)胞:3個(gè)基本注意事項(xiàng)

發(fā)布時(shí)間:2024-12-02     發(fā)布作者:上海通蔚生物

  了解如何冷凍細(xì)胞是從事生物醫(yī)學(xué)研究人員必不可少的知識。研究人員通常會冷凍原代細(xì)胞和細(xì)胞系,以便靈活安排實(shí)驗(yàn)時(shí)間并保持細(xì)胞質(zhì)量。冷凍細(xì)胞庫可確保檢測結(jié)果的可重復(fù)性,并在細(xì)胞培養(yǎng)物受到污染或丟失時(shí)提供備用細(xì)胞來源。


  冷凍細(xì)胞是一個(gè)較為復(fù)雜過程,由于水是活細(xì)胞中最重要的成分,當(dāng)水結(jié)冰時(shí),細(xì)胞代謝就會停止。經(jīng)過適當(dāng)?shù)慕鈨龀绦蚝螅?xì)胞會恢復(fù)正常的生物活動(dòng)。


  冷凍保存細(xì)胞有許多優(yōu)點(diǎn),但由于細(xì)胞暴露在冷凍保護(hù)劑中并且冷凍所需的低溫下,該過程可能會給細(xì)胞帶來壓力。上海通蔚為大家介紹大多數(shù)細(xì)胞冷凍方案。


  選擇正確的冷凍介質(zhì)


  選擇正確的冷凍培養(yǎng)基取決于細(xì)胞系和應(yīng)用,并且需要進(jìn)行優(yōu)化以確保解凍后最高的活力。


  對于大多數(shù)應(yīng)用,應(yīng)該考慮使用生長培養(yǎng)基血清或市售的冷凍培養(yǎng)基,例如二甲基亞砜(DMSO)。在開始細(xì)胞冷凍方案之前,請確保您已經(jīng)準(zhǔn)備好適合懸浮細(xì)胞的溫度和體積的冷凍培養(yǎng)基。


  在進(jìn)入冷凍程序之前,請記住在與細(xì)胞混合后多次上下吹打培養(yǎng)基以確保單細(xì)胞懸浮。此外,最好不要將懸浮液倒入低溫小瓶中,因?yàn)檫@將大大增加污染風(fēng)險(xiǎn)。


  低溫瓶和標(biāo)簽


  用于冷凍細(xì)胞的任何小瓶都應(yīng)適合低溫應(yīng)用。這些小瓶應(yīng)由聚丙烯制成,可承受低至-196°C的溫度。使用聚酯低溫小瓶和可耐受超低溫的粘合劑為您的小瓶貼上標(biāo)簽。在粘貼到小瓶之前,請?jiān)跇?biāo)簽上打印所有重要信息,例如日期、細(xì)胞類型、識別號和濃度。


  細(xì)胞冷凍率和長期儲存


  將細(xì)胞分裝到貼有適當(dāng)標(biāo)簽的低溫小瓶中后,即可開始冷凍程序。與解凍細(xì)胞不同,冷凍過程是一個(gè)緩慢、可控的過程。讓冷凍保護(hù)劑有時(shí)間從細(xì)胞中去除水分至關(guān)重要,這可以降低因冰晶形成而造成損害的風(fēng)險(xiǎn)。


  當(dāng)細(xì)胞被快速冷凍時(shí),水和離子往往會留在細(xì)胞中。這最大限度地減少了溶質(zhì)濃度效應(yīng)和脫水。然而,細(xì)胞內(nèi)的冰形成會通過撕裂和刺穿細(xì)胞膜造成嚴(yán)重?fù)p害。相反,如果細(xì)胞緩慢冷凍,細(xì)胞外的水會在細(xì)胞內(nèi)冰形成之前結(jié)冰。這允許水通過滲透逸出,但會增加細(xì)胞內(nèi)溶質(zhì)的濃度,而這可能是有毒的。


  實(shí)際上,非常快和非常慢的冷凍速度都會導(dǎo)致過量冰形成或溶質(zhì)毒性增加。DMSO等冷凍保護(hù)劑可促進(jìn)脫水、減少冰結(jié)晶并降低溶質(zhì)效應(yīng)。對于大多數(shù)細(xì)胞來說,最佳冷凍速度是每分鐘1°C。正如您在圖表中看到的,在這個(gè)溫度范圍內(nèi),細(xì)胞內(nèi)冰形成的負(fù)面影響與溶質(zhì)濃度的增加達(dá)到平衡。



  這將使細(xì)胞活力達(dá)到最大。


  冷凍細(xì)胞通常是一個(gè)兩步過程,其中細(xì)胞以緩慢、可控的速率冷卻至-80°C,然后在-135°C或更低的溫度下長期儲存。


 步驟1:以控制的速率將細(xì)胞冷凍至-80°C


  如前所述,必須使用控速冷凍機(jī)或控速容器將細(xì)胞以每分鐘約-1°C的速率冷卻至-80°C。


  將凍存瓶放入容器后,可將其放入-80°C冰箱中過夜。12小時(shí)后,凍存瓶即可轉(zhuǎn)移至液氮冰箱中進(jìn)行長期保存。


  值得注意的是,應(yīng)避免將細(xì)胞在-80°C冰箱中儲存超過兩周。在此溫度下儲存時(shí)間過長會導(dǎo)致細(xì)胞死亡和樣品活力降低。


  步驟2:在液氮中長期儲存


  液氮儲存方法有兩種基本類型。一種是將小瓶直接浸入液體中。另一種是將小瓶置于液體上方的氣相中。


  氣相系統(tǒng)在容器內(nèi)形成垂直溫度梯度。在底部,液氮將保持約-196°C的溫度。


  氣相溫度在到達(dá)容器頂部時(shí)會升高。應(yīng)使用足夠的液氮,以確保罐頂部最熱部分的溫度始終低于-135°C


  我們建議將小瓶儲存在氣相中,而不是液相中。代謝活動(dòng)在-135°C時(shí)停止,而液相的額外低溫并沒有帶來真正的好處。


  事實(shí)上,將小瓶浸入液相中存在部分液氮可能滲透并損壞小瓶的風(fēng)險(xiǎn)。


  對于從事免疫學(xué)、毒理學(xué)和其他科學(xué)領(lǐng)域的研究人員和實(shí)驗(yàn)室工作人員來說,學(xué)習(xí)如何冷凍細(xì)胞并使其在解凍后保持最大活力是一項(xiàng)重要技能。


  總而言之,制定細(xì)胞冷凍方案時(shí)主要考慮三個(gè)因素:冷凍介質(zhì)的類型和濃度、低溫小瓶的類型、最佳冷凍速度和長期儲存溫度


  最好使用含有冷凍保護(hù)劑(如DMSO)的冷凍介質(zhì)來冷凍健康且可存活的細(xì)胞。


  冷凍培養(yǎng)基細(xì)胞濃度取決于細(xì)胞和應(yīng)用,因此需要進(jìn)行優(yōu)化以實(shí)現(xiàn)長期儲存。


  低溫瓶應(yīng)帶有外螺紋,額定溫度為-196°C


  冷凍細(xì)胞時(shí),確??刂评鋮s速度為-1°C/min,直至達(dá)到-80°C,然后轉(zhuǎn)移到液氮罐的氣相中進(jìn)行長期儲存。



а天堂中文在线官网在线| 中文字幕大香视频蕉免费| 国产中文字字幕乱码无限| 波多野结衣办公室33分钟| 亚洲人成网站色www| 三级4级全黄60分钟| 50岁熟妇大白屁股真爽| 亚洲无线一二三四区手机| 国产精品v片在线观看不卡| 狠狠色婷婷久久一区二区三区| 岛国一区二区av在线| 欧美人与性动交g欧美精器| 久久久久久久女国产乱让韩| 伊人久久精品一区二区三区| 国产乱子伦视频在线播放| 久久久噜噜噜久久熟女| 18禁成人网站免费观看| 人人妻人人澡人人爽人人精品电影| 乱人伦中文字幕成人网站在线| 嫩草伊人久久精品少妇av| 日韩黄色精品中文视频| 亚洲精品午夜久久久伊人| 久久精品aⅴ无码中文字字幕不卡 亚洲人成精品久久久久 | 国产良妇出轨视频在线观看| 麻豆第一区mv免费观看网站| 国产偷国产偷亚洲清高网站| 日韩精品久久精品三级| 国产av最新一区二区| 麻豆产精国品一二三产区区| 成人深夜福利av在线| 久久精品手机观看| 又爽又色禁片1000视频免费看| 亚洲乱码无码永久不卡在线| 天天拍夜夜添久久精品| 少妇愉情理伦片丰满丰满午夜 | 99精品无人区乱码1区2区3区| 日韩av日韩av在线| 欧美丰满一区二区免费视频| 久久在线视频免费观看| 美女内射毛片在线看3d| 东北女人啪啪对白|