在實驗室里，沒有什么比細胞無法生長或細胞培養(yǎng)物無法附著更令人抓狂的了。細胞生長受阻和培養(yǎng)行為不穩(wěn)定會延誤項目、讓團隊感到沮喪，并使科研人員疑惑到底出了什么問題以及如何解決。

  這些問題的解決方案并不總是那么簡單。細胞培養(yǎng)很復雜，需要花時間來分析過程并找出問題。通常，最常見的問題包括異常生長模式或細胞附著不均勻或不一致。其他問題包括生長速度緩慢或突然變化或無法解釋的結(jié)果。

  這些問題往往與培養(yǎng)技術(shù)、孵化和培養(yǎng)基有關(guān)。跟隨上海通蔚生物一起探討一下這些痛點，以及如何通過良好的做法預防它們的影響。

  什么原因?qū)е录毎囵B(yǎng)失敗？如何處理？

培養(yǎng)技術(shù)

  細胞培養(yǎng)是一個復雜的過程，任何步驟的失誤都可能導致培養(yǎng)失敗。當細胞培養(yǎng)出現(xiàn)問題時，首先要評估的是處理技術(shù)，因為處理不當是導致失敗的常見原因。下面通蔚生物為大家盤點幾種細胞培養(yǎng)技術(shù)中比較常見的原因：

  細胞接種物處理不均勻或混合不充分會產(chǎn)生泡沫，從而阻礙細胞生長和附著，并在容器上留下斑點。使用無菌吸管或移液器輕輕混勻細胞懸液，確保細胞均勻分布在培養(yǎng)容器中。避免過度混合，以免產(chǎn)生泡沫。

  靜電會破壞塑料容器中的細胞附著，尤其是在干燥環(huán)境。打開容器時，盡量不要讓容器與包裝摩擦。擦拭容器外部或使用防靜電設(shè)備也可以阻止靜電。

  細胞接種量不足會導致容器壁上細胞生長過快。根據(jù)細胞類型和培養(yǎng)面積選擇合適的接種量。觀察細胞生長情況，及時調(diào)整接種量。

  滾輪瓶的旋轉(zhuǎn)速度可能會導致大量生長或結(jié)塊。將起始速度設(shè)置為每分鐘半轉(zhuǎn)至每分鐘一轉(zhuǎn)之間，并根據(jù)需要進行調(diào)整。保持滾輪清潔，以防止打滑或失速。

  定期觀察細胞生長情況，注意細胞形態(tài)、密度、生長速度等變化。通?？梢耘袛喑龀霈F(xiàn)了問題。為了最好地檢測這些問題，使用戊二醛或乙醇固定樣本培養(yǎng)物，然后在觀察前對其進行染色。除了上述培養(yǎng)技術(shù)中幾個問題，下面為大家也列出關(guān)于孵化和細胞培養(yǎng)基問題。

  孵化問題

  盡管使用培養(yǎng)箱的目的是盡量減少溫度變化等環(huán)境因素，但許多變量仍然會影響生長速度和培養(yǎng)活力：

  在實驗過程中反復打開培養(yǎng)箱會導致溫度變化；容器的堆放方式和位置也會導致溫度變化。除非迫不得已，否則不要打開培養(yǎng)箱，并將關(guān)鍵培養(yǎng)物放在后面。還要考慮堆放培養(yǎng)皿的位置效應(yīng)；最下面的培養(yǎng)皿最靠近金屬架，因此加熱速度更快。

  蒸發(fā)影響細胞生長速度和模式；保持水箱充滿水并使用氣體洗滌缸加濕進入的氣體可最大限度地減少蒸發(fā)。

  振動會導致細胞生長異常，例如形成同心細胞環(huán)。振動可能來自孵化器中松動的風扇馬達，也可能來自其他任何來源，例如人流或電動設(shè)備。將孵化器放置在堅固的表面上，且沒有其他會振動的設(shè)備。

  其他環(huán)境預防措施，如保持孵化器水平且不含有毒雜質(zhì)，對于正常生長也至關(guān)重要。

  細胞培養(yǎng)基問題

  培養(yǎng)基缺陷并不總是可見的，許多因素（例如試劑質(zhì)量不足、緩沖液和過濾，甚至熒光毒性）都會影響培養(yǎng)基的功能。

  除了確保你使用正確的配方進行研究并購買高質(zhì)量的用品外，測試培養(yǎng)基功能的最佳方法是進行實驗。將有問題的培養(yǎng)基與其他制造商的相同培養(yǎng)基進行比較。如果新培養(yǎng)基產(chǎn)生相同的結(jié)果，則可能是技術(shù)或孵化方面的問題。

  上述為大家羅列出細胞培養(yǎng)過程經(jīng)常遇到的一些問題，大家如果遇到細胞培養(yǎng)問題，可以逐一的去找到對應(yīng)原因進行解決問題。如果對細胞培養(yǎng)還有什么疑問，歡迎前來咨詢通蔚生物，通蔚生物有多年的細胞培養(yǎng)經(jīng)驗，包括代測服務(wù)。同時也祝您今后細胞培養(yǎng)更上一層樓。