在ELISA實驗過程，我們實驗過程經(jīng)常會出現(xiàn)一些誤差，例如操作誤差、樣本試劑誤差、儀器誤差等。為了實驗更順利進(jìn)行，我們需要了解酶聯(lián)免疫吸附實驗常見的誤差。今天，通蔚生物為大家詳細(xì)介紹下在ELISA實驗中常見的誤差。

  1、留意試劑盒保質(zhì)期。買回來的試劑盒除了正確的保存之外，要留意試劑盒的保質(zhì)期，過期的試劑盒請誤用于實驗。

  2、咨詢閱讀說明書。在進(jìn)行ELISA實驗前，請詳細(xì)閱讀說明書，嚴(yán)格按照說明書規(guī)范進(jìn)行規(guī)范化操作。對于不同批號的試劑盒不可混用，對于值得改進(jìn)的地方要反復(fù)實驗確定成立后才能改進(jìn)。

  3、評估試劑實用及穩(wěn)定性。試劑的穩(wěn)定性和實用性保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性和可重復(fù)性至關(guān)重要！在試劑啟用之前，務(wù)必進(jìn)行陰、陽對照及樣品反復(fù)比照試驗，如試劑符合要求，方可使用。

  4、使用校對過的微量移液器，排除自然誤差。移液器應(yīng)該定期校準(zhǔn)，頻率取決于使用頻率、環(huán)境條件和實驗室的質(zhì)量要求。一般建議至少一年校準(zhǔn)一次，如果使用頻繁或?qū)纫筝^高，則需要更頻繁地校準(zhǔn)，例如每三個月或半年一次。如果移液器曾經(jīng)跌落、損壞或暴露在極端環(huán)境下，則需要重新校準(zhǔn)。

  5、加樣準(zhǔn)確，快速。加樣或多或少，對酶生成物的量不能確定，直接會影響顯色的結(jié)果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān)！因此，加樣要慎重！這里要求大家在加樣盡量做到在一定時間內(nèi)加樣完畢的實驗，如果加樣遲緩，便出現(xiàn)誤差，而且試劑長時間暴露在外，尤其室溫過高時，保存期會縮短甚至失效。

  6、洗滌液要新鮮，洗滌要徹底。不新鮮的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象，也可能出現(xiàn)假陽性。這里要求大家在使用洗滌液現(xiàn)用現(xiàn)配的原則；在洗滌過程要徹底，否則酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。

  7、嚴(yán)格的控制反應(yīng)時間。 反應(yīng)時間過長，酶容易失活；反應(yīng)時間過段，酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合，生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。

  8、嚴(yán)格的掌握顯色時間。認(rèn)真閱讀試劑盒說明書，每個ELISA試劑盒都有其推薦的顯色時間范圍，通常在5-30分鐘之間。顯色時間過短，加入終止液反應(yīng)終止后，底物結(jié)合物的量過少，易出現(xiàn)假陰性；如果超過顯色時間，如操作誤差（如孵育溫度過高）、試劑污染等也可能導(dǎo)致非特異性顯色，這些情況也可能造成顏色過深。

  上述為大家介紹ELISA實驗過程如何避免誤差，細(xì)節(jié)決定成??！從細(xì)微的實驗中觀察，實驗和總結(jié)，避免因誤差導(dǎo)致實驗反復(fù)！也希望上述內(nèi)容對您的實驗有所幫助，如果您還有更好的減小實驗誤差妙招請多交流！